ELISA即酶聯(lián)免疫吸附法，是一種常用的固相酶免疫測(cè)定方法。 由于ELISA方法簡(jiǎn)單，方便，靈敏，特異性強(qiáng)且不需要特殊設(shè)備(只需要酶標(biāo)儀就可以)，所以被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體測(cè)定。
但是影響ELISA測(cè)定的因素有很多，而其操作中需要有一定的技術(shù)要求，如操作手法，環(huán)境，樣本等，有時(shí)常可見(jiàn)到一些錯(cuò)誤結(jié)果(即假陽(yáng)性或假陰性)等，小編為大家解讀ELISA檢測(cè)的影響因素之一樣本的影響
樣本的影響有哪些?
1、樣本的保存：在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本，在間接法ELISA測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、會(huì)造成假陽(yáng)性;為避免上述問(wèn)題，在
ELISA試劑盒測(cè)定血清標(biāo)本時(shí)最好能新鮮采集;如果不能立即測(cè)定，根據(jù)相應(yīng)的時(shí)間保存相應(yīng)的溫度，5 d內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃，1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)-20℃低溫凍存;如凍存后融解的標(biāo)本，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混合后再測(cè)定，但混勻時(shí)應(yīng)輕柔，不可強(qiáng)烈振蕩。
2、樣本的時(shí)間：因?yàn)樗芰显嚬苣芪娇乖镔|(zhì)，所以樣本長(zhǎng)時(shí)間放在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。方法是使用真空采血管;并使用非抗凝標(biāo)本，肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值，EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過(guò)氧化物酶活性。
3、樣本受細(xì)菌污染：因菌體中可能會(huì)含有內(nèi)源性辣根過(guò)氧化物酶，因此，被細(xì)菌污染的標(biāo)本同溶血標(biāo)本一樣，可能會(huì)產(chǎn)生非特異性顯色而干擾測(cè)定結(jié)果。
4、樣本的凝固：樣本凝固不全。在實(shí)驗(yàn)中，有的時(shí)候心急為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè)，ELISA試劑盒在血液還未開(kāi)始凝固的時(shí)候就強(qiáng)行離心分離血清，導(dǎo)致血清中仍殘留部分纖維蛋白原，在ELISA測(cè)定過(guò)程中形成肉眼可見(jiàn)的纖維蛋白塊，易造成假陽(yáng)性結(jié)果;因此血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。
5、樣本溶血：溶血標(biāo)本及混有紅細(xì)胞的血清采用ELISA法檢測(cè)易產(chǎn)生假陽(yáng)性。可能是溶血血清中含有過(guò)氧化酶物質(zhì)(紅細(xì)胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素)，ELISA試劑盒在洗滌過(guò)程中往往難以*洗脫，它可使H2O2釋放出原生態(tài)氧(O)，從而催化底物四甲基聯(lián)苯胺生成可溶性的有色物質(zhì)，即顯藍(lán)色，產(chǎn)生假陽(yáng)性[2]。所以嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。
