elisa試劑盒測(cè)定值與文獻(xiàn)中相差太大怎么辦?
(1)、生化測(cè)定主要目的是比較處理內(nèi)和處理間該指標(biāo)的變化。同時(shí)，要測(cè)定絕對(duì)值，往往是很可能甚至不可能的。因此，追求的不是絕對(duì)值而是相對(duì)值。
(2)、用不同測(cè)定方法和不同測(cè)定條件下得到的測(cè)定值可能存在很大差異。因此，如果測(cè)定方法不同，同一樣品的測(cè)定值通常是不可以直接比較的。這也是建議使用試劑盒測(cè)定的理由之一。因?yàn)椴煌髡哂猛辉噭┖袦y(cè)定的數(shù)據(jù)才是可以相互比較的。
(3)、同一種材料，不同處理、不同發(fā)育狀態(tài)和不同器官其生化指標(biāo)可能發(fā)生很大變化。因此，能夠直接用來比較的文獻(xiàn)資料本來就不多。
(4)、當(dāng)然，話說回來，測(cè)定值如果與文獻(xiàn)報(bào)道相差太大，首先應(yīng)該檢查單位是否一致，包括摩爾還是毫摩爾，是干重、鮮重還是蛋白質(zhì)濃度，是分鐘還是秒，等等。其次，檢查計(jì)算是否有誤?最后，如果相差不是數(shù)量級(jí)，通常是很正常的。
elisa試劑盒反應(yīng)五要素有哪些?
(1)、引物的特異性：引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
(2)、引物擴(kuò)增跨度： 以200-500bp為宜，特定條件下可擴(kuò)增長至10kb的片段。
(3)、避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級(jí)結(jié)構(gòu)，ELISA試劑盒避免兩條引物間互補(bǔ)，特別是3'端的互補(bǔ)，否則會(huì)形成引物二聚體，產(chǎn)生非特異的擴(kuò)增條帶。
(4)、引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuò)增效果不佳，G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC隨機(jī)分布，避免5個(gè)以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
(5)、引物3'端的堿基，特別是末及倒數(shù)第er個(gè)堿基，應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。
(6)、引物中有或能加上合適的酶切位點(diǎn)， ELISA試劑盒被擴(kuò)增的靶序列有適宜的酶切位點(diǎn)， 這對(duì)酶切分析或分子克隆很有好處。
(7)、引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
