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小鼠外周血淋巴細胞分離液試劑盒

本分離液為Ficoll、羥乙基淀粉550與泛影酸葡jia胺的混合液?？鼓庵苎稍诜蛛x液中分層。離心時，在Ficoll、羥乙基淀粉的作用下紅細胞與粒細胞聚集并迅速沉降；此時，淋巴細胞及其他單個核細胞仍處于分離液上層，紅細胞污染可忽略不計。大部分血小板可在細胞清洗低速離心過程中去除。 其他人及動物多種比重細胞分離液，因不同種屬不同比重分離液的細胞離散系數(shù)及細胞帶電不同，用戶在制定分離液時應提供所需分離液的比重、動物種屬及被分離細胞的名稱。

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注意事項：

A．本實驗要求，在正常大氣壓下，分離液、分離樣本以及分離環(huán)境溫度為20℃±2℃。分離液在低溫時呈較高密度，在高溫時呈較低密度。細胞分離液從冰箱取出后，不可立即使用，操作前可將樣本和分離液復溫18-22℃。為獲得實驗結果，建議在取血后2小時內進行實驗，血液提取后存放時間越長細胞活性越低。

B．實驗過程中，如需稀釋血液或洗滌細胞，不可使用含Ca、Mg離子的緩沖液及培養(yǎng)液，其成分會導致血細胞凝集，大大降低細胞得率及純度。

C．you抗凝劑選擇：EDTA、枸櫞酸、肝素，其他抗凝劑也可使用，但會影響細胞活性。應注意在血液稀釋過程中去除抗凝劑體積。

D．實驗操作時，不可使用含粉手套、不可使用內毒素含量過高的液體，手套中的粉末顆粒及高內毒素會激活淋巴細胞從而降低細胞得率及活性。

E．本實驗不可使用高聚合材質（如聚苯乙烯）的塑料制品，其帶有的靜電作用將導致細胞貼壁影響分離效果。推薦使用未經(jīng)過堿處理的玻璃離心管。

F．吸取過多的淋巴細胞層及分離液層會導致分離液交界處的粒細胞被吸出從而使混雜的粒細胞數(shù)量增加。吸取過多的淋巴細胞層上層溶液會導致血漿蛋白及血小板混雜。

G．如需進行B、T細胞計數(shù)，則需血液貯藏時間不得多于10小時，否則將導致細胞被激活，得率降低。

H．為去除所混雜的血小板，可在分離液上層加上4-20%蔗糖梯度等滲溶液進行二次離心。

I．細胞純度可在步驟10后使用瑞氏染色方法確定，細胞活性可用臺盼藍處理后觀察。

J．由于各品牌離心機的性能不同，國內南北地區(qū)溫度環(huán)境和四季的差異，可能影響分離效果，用戶可以調節(jié)離心轉數(shù)和離心時間，摸索jia的分離條件（具體分離條件各實驗室自定）。

參考文獻：
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《Immunogenicity evaluation of MS2 phage-mediated chimeric nanoparticle displaying an immunodominant B cell epitope of foot-and-mouth disease virus》 作者:Guoqiang Wang, Yunchao Liu, Hua Feng, Yumei Chen, Suzhen Yang, Qiang Wei, Juan Wang, Dongmin Liu, Gaiping Zhang 期刊:PeerJ 影響因子:2.353 PMID:29844975