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雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒

試劑組成和配制試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。標(biāo)準(zhǔn)品：液體×1 瓶，5 mg/mL，4℃保存。樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取 1. 液體樣品：澄清無色液體樣品可以直接測定。 2. 組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋） 3. 細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

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測定操作 1. 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。 2. 空白管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 蒸餾水，1000μL 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，于 540nm 比色，記為 A 空白管。 3. 標(biāo)準(zhǔn)管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 標(biāo)準(zhǔn)液，1000μL 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，于 540 nm 比色，記為 A 標(biāo)準(zhǔn)管。 4. 測定管：取 1 mL 玻璃比色皿，加入 200μL 待測液，1000μL 試劑一，混勻后室溫靜置 15 min，于 540nm 比色，記為 A 測定管。

注意事項(xiàng)： 1.樣品蛋白濃度須在 1~10mg/ml 范圍內(nèi)，低于 1mg/ml 不能用此法，高于 10mg/ml 須做相應(yīng)稀釋。因此測定前用 1~2 個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn)，確保蛋白濃度在 1~10mg/ml 范圍內(nèi)。 2.待測樣品蛋白提取可用生理鹽水、雙蒸水或不含蛋白的 PBS 提取。該法受硫酸銨、Tris 緩沖液干擾，提取液中應(yīng)不含這些物質(zhì)；否則改用 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。